使用軟體: ABI Primer Express 2.0
1.上NCBI，用Nucleotide資料庫找出所要的Gene sequence。把ATCG序列存下來到記事本(建議用Fasta偶模式存)
2.打開Primer Express，點選File>New>TagMan MGB Probe & Primer Design
3.點選Import DNA profile，選剛剛存下來含ATCG序列的記事本，程式會自動編排好
4.點選Options>Find Primers/Probes Now。程式會自動幫你找出可以當Primer/Probe的位置 (接下來我們人工要做的就是確定這段序列會不會有太多的CG鍵結，因為CG鍵結含3個氫鍵要打斷不像AT鍵結那麼容易
5.分頁切換到Primer
6.點選Options>Show Primer Secondary Structure。視窗會顯示出該段Primer的CG鍵結數目，依序比對直至找到適當序列
7.若沒有找到適當的Primer，把原來程式挑出來的位置給剔除，讓程式再找一次 (要是還找不到就真的沒辦法了)
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