[實診]Southern Blot & Hybridization

4/17實診上課筆記-Southern Blot & Hybridization (by 何中良老師)
用途：看一段DNA中有沒有我們欲探討的序列 (ex:β-hemoglobin gene)
方法：

1. 將DNA用適當的限制酶切成許多小段
    
2. 跑膠，將DNA片段由小到大分離
   • 將DNA loading在被染色的well中
   • 跑膠
   • 方向：由陰極(黑)→正極(紅)
      
     跑完之後大概像這樣：
     
3. 將DNA transfer到較硬的nylon membrane上
    
   • Transfer DNA：Southern Blot
   • Transfer RNA：Northern Blot
     之後壓乾讓它固定：
     
4. Hybridization
   • 用Labeled DNA probe (含isotope的 single strain β-hemoglobin gene之互補基因)偵測裡面有沒有我們要的序列
     

...使用此方法可提供DNA fragment, size, identification的資訊
搭配相對應的限制酶，可檢測DNA序列是否正常
ex:用Dde限制酶的可切斷(下圖紅箭頭)與否來判斷病人是否有sickle cell anemia