2009年4月22日

[實診]Southern Blot & Hybridization

4/17實診上課筆記-Southern Blot & Hybridization (by 何中良老師)
用途:看一段DNA中有沒有我們欲探討的序列 (ex:β-hemoglobin gene)
方法:

  1. 將DNA用適當的限制酶切成許多小段
     
  2. 跑膠,將DNA片段由小到大分離
    • 將DNA loading在被染色的well中
    • 跑膠
    • 方向:由陰極(黑)→正極(紅)
       
      跑完之後大概像這樣:
  3. 將DNA transfer到較硬的nylon membrane上
     
    • Transfer DNA:Southern Blot
    • Transfer RNA:Northern Blot
      之後壓乾讓它固定:
  4. Hybridization
    • 用Labeled DNA probe (含isotope的 single strain β-hemoglobin gene之互補基因)偵測裡面有沒有我們要的序列

...使用此方法可提供DNA fragment, size, identification的資訊
搭配相對應的限制酶,可檢測DNA序列是否正常
ex:用Dde限制酶的可切斷(下圖紅箭頭)與否來判斷病人是否有sickle cell anemia

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